Диагностика сифилиса – как определить сифилис? Лабораторная диагностика сифилиса – трепонемные, нетрепонемные тесты

Лабораторные методы диагностики сифилиса

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Методы диагностики сифилиса: как найти врага

В статье будет подробно разъяснено о тех методиках, которые направлены на идентификацию возбудителя сифилиса, о проведении анализов, их чувствительности, и что самое важное – специфичности для спирохеты. Короткое введение в особенности строения и антигенного состава бледной трепонемы, отмеченные вначале статьи, позволят понять диагностические методы, описанные далее.

Методы диагностики сифилиса представляют собой то, с помощью которого мы можем обнаружить сифилис – циклически протекающее заболевание, передающееся половым путем, возбудителем которого является бледная трепонема. Наверняка, каждый слышал о нем, и о реакции Вассермана, но об ее особенностях и применении сегодня мы поговорим несколько позже.

Кроме первичной, вторичной и третичной форм сифилиса существует и его латентное течение, при котором явные симптомы отсутствуют, развивается «затишье», однако заболевание не исчезает. Данный этап опасен из-за низкой частоты диагностики, но высокого шанса на активизацию процесса, но уже с новыми силами. Потому охват более широкого числа людей для диагностики помогает обнаружить даже «скрывшуюся» на первый взгляд болезнь.

Особенности возбудителя

Бледная трепонема – извитой формы микроорганизм, который при рассмотрении его под микроскопом, напоминает дождевого червя. Завитки позволяют ей вращаться вокруг своей оси и совершать ряд поступательных движений. «Бледной» спирохету сделала плохая окраска анилиновыми красителями.

Большинство микроорганизмов есть возможность культивировать на искусственно созданных питательных средах, как вирус гриппа на куриных эмбрионах, или возбудитель шанкроида на шоколадном агаре. Бледная спирохета не является из числа таковых.

Ее естественная среда обитания – человек. Потому, так как диагностировать сифилис путем выращивания культуры не удается, был изобретен ряд других методик, позволяющих подтвердить ее наличие в организме человека.

Возбудитель сифилиса является малоустойчивым организмом, в связи, с чем вне среды организма человека погибает довольно быстро. Путь заражения в подавляющем большинстве половой, однако, может быть трансплацентарным (от матери к ребенку) и контактным, чаще встречающимся среди медицинского персонала. Входными воротами являются слизистые оболочки, где на месте внедрения спирохета образует язву – твердый шанкр.

Бледная трепонема имеет способность к генерализации в организме человека, благодаря чему мы знакомы с клиникой сифилиса такой, какая она есть. Образование сифилитических гумм характеризует заболевание как специфический вид воспаления и способно тяжело поражать различные системы органов, включая ЦНС, кардиоваскулярную систему, органы чувств и так далее.

Лабораторная диагностика сифилиса, а что еще важнее – ее соответствующее применение и правильная интерпретация важны как для раннего обнаружения болезни, так и для подбора оптимальной терапии.

Кого будем проверять?

Диагностировать можно как пациентов с явными и не очень симптомами заболевания, так и совершенно бессимптомных индивидуумов.

Как определить, кого направить на диагностику? Очень просто – первая группа (симптоматическая) в любом случае требует проведения ряда анализов, вторая – касается лишь людей, относящихся к группе повышенного риска.

Высокая степень риска носительства бледной трепонемы присуща следующим категориям людей:

• пациенты, чей половой партнер был диагностирован ранее с сифилисом;
• лица нетрадиционной ориентации;
• пациенты с положительным ВИЧ статусом;
• анамнез жизни, отягощенный тюремным заключением или работой, связанной с предоставлением секс-услуг.

Внимание! В обязательном порядке скринингу на сифилис подлежат все беременные женщины при постановке их на учет, независимо от степени риска. Такой подход направлен на снижение частоты встречаемости врожденных форм сифилиса за счет ранней его диагностики.

Диагностические тесты

Серологическая диагностика сифилиса – самый распространенный метод его обнаружения, обеспечивает нас предположительным диагнозом. Выделяют нетрепонемные и трепонемные тесты.

Изолированное использование только одного вида анализов не позволяет подтвердить диагноз из-за достаточно высокой частоты ложноположительных результатов.

Кроме всего прочего, серодиагностика сифилиса базируется на гуморальном иммунном ответе организма на инфекцию. Так, пациенты с заведомо известной иммунной супрессией, имеют немалый шанс получения ложноотрицательных результатов анализов.

• Нетрепонемные тесты. Их действие основано на реакции сыворотки инфицированного человека на сифилитические антигены. Традиционно они используются только для первичного скрининга из-за своей неточности и неспецифичности. Однако благодаря им есть возможность выделить группу людей повышенного риска для наличия сифилитической инфекции.

Положительными сторонами использования являются их низкая цена, легкость в исполнении и возможность количественной оценки, применяемой для определения ответной реакции организма на проводимое лечение. Нетрепонемные тесты включают в себя такие методики, как RPR (rapid plasma reagin test) – анализ быстрых реагинов, VDRL (venereal disease research laboratory) – реакция микропреципитации, а также TRUST-тест.

Положительный результат исчисляется в титрах антител к бледной трепонеме, циркулирующих в организме человека (как IgM, так и IgG). Даже при отсутствии специфической терапии титры имеют особенность ослабевать, однако применение антисифилитического лечения приводит к значительному снижению титров антител, и потому может быть использовано как качественный индикатор эффективности терапии. О применении данных тестов рассказано также в видео в этой статье.

• Трепонемные тесты. Данная группа анализов является более финансово затратной, а также значительно сложней в исполнении, по сравнению с нетрепонемными тестами. Традиционно они используются как подтверждающий метод при положительном результате скринингового метода.
  Специфические трепонемные тесты включают в себя реакции иммунной флюоресценции, РПГА (реакция прямой гемагглютинации), ИФА (иммуноферментный анализ), а также реакция иммобилизации трепонем.

Данная группа анализов направлена на обнаружение специфических антител, направленных на определенные антигены бледной спирохеты, за счет чего считаются более достоверными. В отличие от нетрепонемных тестов, результаты анализов данной группы исключительно качественные, а не количественные.

Важно! Большинство таких тестов не различают результат между впервые диагностированным, и ранее перенесенным заболеванием, так как направлены на обнаружение антител, которые сохраняются в организме даже после полноценного лечения.

• Прямые методы диагностики. Не смотря на то, что микроорганизм невозможно культивировать искусственно, это не мешает его визуализировать. Для этого используется микроскопия в темном поле и прямая реакция иммунофлюоресценции (DFA, direct fluorescent antibody testing). Однако ни один из этих тестов не распространен повсеместно, так как требует специального оборудования для проведения диагностики.

Внимание! Микроскопия в темном поле – это не только достоверный анализ, но и экспресс метод диагностики сифилиса, которым можно исследовать любые среды, выделенные из сифилитических повреждений.

• Также все более широко начинает использоваться ПЦР (полимеразная цепная реакция), смысл которой заключается в обнаружении ДНК спирохеты. Специфичность такого теста достигает до 98%, однако достаточно широкое внедрение данного метода ограничено финансовыми вопросами, так как ПЦР – достаточно дорогостоящий анализ.

Подход в диагностике реального пациента

Одно дело разобрать, какие тесты используются в обнаружении сифилиса, и совсем другие – понять, что делать с пациентом с вероятным диагнозом «сифилис», а именно – что говорит инструкция, алгоритм назначения диагностических мероприятий.

Первым этапом лабораторной диагностики является серология, а именно нетрепонемные тесты. Несмотря на недостаточную специфичность, с их помощью можно определить – требуется для данного конкретного человека дальнейшее обследование.

Чаще с этой целью используют тест быстрых реагинов (RPR). Положительный результат переводит к следующему этапу – более специфичному трепонемному тесту, например ИФА (наиболее используемому) или РИФ.

Важно! Отрицательный результат первичного исследования у бессимптомных пациентов не требует последующих анализов.

Интерпретация серологических тестов

Правильное заключение результат зависит на клинических проявлениях заболевания у пациента, его иммунного статуса, наличия коморбидных патологий, истории сифилиса ранее в течение жизни.

1. Положительный нетрепонемный и положительный трепонемный. Такая комбинация у человека, ранее не переносившего сифилис является достоверным первичным диагнозом «сифилис», который требует лечения и детальной оценки с целью определения стадийности заболевания. В свою очередь, пациент, анамнез жизни которого отягощен данной патологией в прошлом, требует более тщательного обследования. Врач в таком случае должен полагаться также на данные физикального обследования и титры нетрепонемного теста.
2. Позитивный нетрепонемный и негативный трепонемный. Подобного рода комбинация в случае диагностики сифилиса чаще характеризует ложноположительный результат тестирования пациента. Получению такого ответа при исследовании может способствовать имеющийся в организме аутоиммунный процесс (например, СКВ), острый период болезни (эндокардит), хронические заболевания печени, иммунизация, проведенная незадолго до диагностики сифилиса.
3. Отрицательный нетрепонемный и положительный трепонемный. Данная картина наиболее характерна для пациента, эффективно вылечившего ранее существующий у него сифилис, при котором остались специфический для бледной трепонемы антитела. Для такого человека обследования на сифилис на этом заканчиваются, и тест считается отрицательным на момент проведения тестирования. Если же анамнез по сифилису такого пациента не отягощен, дальнейшее обследование требует детализации, направленного на поиск признаков сифилиса, оценки факторов риска для конкретного больного.
4. Отрицательная серология. Среди людей с прогрессивными формами угнетения иммунного ответа (чаще это пациенты уже с развитым СПИДом) встречаются случаи ложноотрицательных анализов за счет недостаточного ответа иммунной системы на поступивший антиген.

Важно! Ложноотрицательный результат у пациента с явными симптомами первичного сифилиса возможен в случае, если серологическая диагностика проводилась в то время, когда еще не успели выработаться антитела.

Вариант латентного течения сифилиса в свою очередь требует особого внимания. Положительная серология в комплексе с отсутствием каких-либо видимых признаков инфекции создает проблему для врача.

Необходимо определить – это ложноположительный результат и есть сопутствующая патология, являющаяся тому причиной, или это скрытое течение сифилиса.

Каждый подобный клинический случай врач рассматривает индивидуально, так как есть необходимость решить главный вопрос – требуется ли лечение для данного больного.

Информирование пациентов

Широкое информирование людей о том, как можно заразиться бледной трепонемой, как обезопасить себя от инфицирования, как диагностируется сифилис – важные шаги, направленные на предупреждение распространения заболевания.

Методы защиты, используемые при половых контактах любого рода – важный фактор здоровой жизни. Такие вещи должны объясняться людям, начиная со средних-старших классов, так как подобного рода вопросы очень редко затрагиваются дома.

В заключении важно отметить, что, как и в любом заболевании – ранее выявлении прямо пропорционально эффективному лечению, а предупреждение его поможет уберечь не только себя, но и окружающих людей.

Частые вопросы врачу

Желание пациента

Здравствуйте! Зовут меня Игорь, мне 29 лет. Интересует, где проводится экспресс-диагностика сифилиса, и есть ли возможность пройти ее без направления? Прочел, что множество бывает случаев латентного течения болезни. Хотелось бы самостоятельно пройти тестирование.

Добрый день, Игорь. Спасибо за Ваш вопрос. Действительно, в последнее время все чаще поднимается вопрос заболеваний, передающихся половым путем, все меньше умалчивается данная тема.

Распространяются «выездные» лаборатории, которые осуществляют анонимную скрининговую диагностику людей, зачастую даже бесплатную. Вы можете узнать о наличии подобной лаборатории в своем городе, или обратиться в частную лабораторию с целью диагностики.

Нетрепонемные тесты

Реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном; реакция Вассермана (РСК с КА) для выявления АТ к бледной трепонеме может быть выполнена в качественном и количественном (с различными разведениями сыворотки) вариантах. Количественный вариант используется как для диагностики (высокие титры характерны для ранних стадий сифилиса), так и для контроля за эффективностью терапии (снижение титра реагиновых АТ и последующая серонегативация). Кроме сыворотки крови, для исследования могут быть использованы образцы СМЖ.

Чувствительность и специфичность РСК ограничены: результаты исследования положительны приблизительно в 70% случаев при первичном сифилисе (спустя 1–4 недели после появления шанкра); отрицательны почти у 30% пациентов с поздним (третичным) сифилисом; отмечается высокий процент ложноположительных результатов.

К недостаткам метода также относятся: сложность выполнения; субъективность оценки результатов; невозможность автоматизации; низкая воспроизводимость. Реакция Вассермана прослужила человечеству ровно 100 лет. С 2006 года, согласно приказу Минздрава РФ № 87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса», РСК была заменена менее трудоемкими кардиолипиновыми тестами – RPR, МРП, VDRL и др.

Rapid Plasma Reagins (RPR) относится к макроскопическим нетрепонемным флокуляционным тестам. Постановка реакции крайне проста. Время получения ответа – 8 мин.

Для образцов, давших положительный результат, выполняют исследование в полуколичественном варианте. Значение титра используется для последующего контроля эффективности лечения (серонегативация): после адекватной терапии первичного и вторичного сифилиса титр должен снижаться по крайней мере в 4 раза через три – четыре месяца и в 8 раз через 6–8 месяцев. У большинства пациентов, пролеченных на ранних стадиях инфекции, титры снижаются вплоть до минимального или порогового уровня чувствительности реакции приблизительно через год.

Специфичность RPR–теста составляет 98%, чувствительность зависит от стадии сифилиса, при первичном сифилисе составляет 86%, при вторичном – 100%, при скрытом – 98%, при позднем сифилисе – 73%.

Преимущества RPR–теста: самая высокая чувствительность среди нетрепонемных тестов при первичном, скрытом и позднем сифилисе; быстрота получения ответа; низкая стоимость анализа; удобство постановки реакции, пригодность для индивидуальной постановки и для массового скрининга; наличие готовых стандартных наборов; стандартизация результатов, получаемых в различных лабораториях; прекрасная сочетаемость с современными подтверждающими трепонемными тестами (в частности, с РПГА).

Реакция микропреципитации (РМП). Специфичность РМП оценивается в 98%, чувствительность при различных стадиях сифилиса меньше других стандартных нетрепонемных тестов (RPR) и составляет при первичном сифилисе – 81%; при вторичном – 91%; при скрытом – 94%. Недостатком РМП можно считать меньшую чувствительность в сравнении с другими НТТ.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 – 2020

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро “Шоссе Энтузиастов”, “Перово”
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Методы диагностики сифилиса

Статистика заболеваемости сифилисом в России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.

Как диагностировать сифилис?

Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:

1. В первой группе исследований — тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
2. Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.

Лабораторная диагностика сифилиса

Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.

Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.

Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.

Темнопольная микроскопия

Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:

1. Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
2. Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.

Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.

RIT-тест

RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.

Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.

Серодиагностика сифилиса

Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.

К нетрепонемным тестам относятся:

• РМП — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
• RPR — тест быстрых плазменных реагинов.

Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.

Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.

К трепонемным тестам относятся:

1. ИФА — иммуноферментный анализ;
2. РПГА — реакция пассивной гемагглютинации;
3. РИФ — реакция иммунофлюоресценции;
4. иммуноблоттинг;
5. ИХЛ — иммунохемилюминесценция;
6. РИБТ (РИТ) — реакция иммобилизации бледных трепонем.

Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.

Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.

Экспресс-диагностика сифилиса

Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:

• Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
• Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.

Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.

Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.

Сам анализ занимает немного времени:

1. Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
2. Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
3. В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.

Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.

Где можно сдать анализ на сифилис?

Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:

Какая клиническая и лабораторная диагностика проводится при сифилисе?

Визуальная и лабораторная диагностика сифилиса в медицинской практике используется широко при обследовании возможно инфицированных людей, как скрининговый метод перед разноплановыми оперативными вмешательствами и в рамках ежегодных профессиональных осмотров некоторых категорий граждан (работники с повышенным риском заражения).

По каким внешним признакам можно диагностировать?

Инкубационный период никак себя не проявляет, и человек даже не подозревает, что он заболел.

Признаки первичного периода

Диагноз сифилис в первичном периоде можно заподозрить при наличии твердого шанкра. Он представляет собой папулу с изъязвлением поверхности и плотным основанием. Шанкр ярко-красного цвета с блестящим грязно-желтым дном язвенного дефекта. Края язвы четкие в виде блюдца круглой или овальной формы. Основным отличительным признаком является безболезненность образования. Локализован шанкр чаще на наружных половых органах, но возможна находка в полости рта или заднего прохода.

«При сифилисе первым наказуется то место, которым согрешили» (французское выражение). Редко возникают твердые шанкры на пальцах рук, веках, кончике носа, волосистой части головы, на спине, затылке, подошвах и голенях.

Признаки вторичного периода

Выявление сифилиса вторичного периода связано с появлением на коже и слизистых высыпаний. Они носят название сифидид. Различают пятнистые, папулезные (в виде узелка), пустулезные (в виде гнойника), везикулезные (в виде пузырька) сифилиды. У большинства больных остается твердый шанкр в той или иной сохранности. На коже появляются участки пигментации, выпадают волосы. Сифилиды могут поражать внутренние органы, нервную систему, кости. Через 2-3 месяца высыпания исчезают, а затем возвращаются.

После сифилид не остается рубцов, они не вызывают общего ухудшения состояния, не склонны сливаться, заразны, хорошо поддаются лечению.

Признаки третичного периода

В последние годы третичный сифилис встречается крайне редко. Он является спутником асоциальных элементов общества, алкоголиков, лиц с иммунодефицитами. Кроме того, при недолеченном сифилисе первого и второго периода болезнь может прогрессировать дальше, что в течение 4-5 лет приведет к развитию поражений не только кожи, но и внутренних органов, нервной системы и глаз. Возникают третичные сифилиды, которые характеризуются низкой заразностью, мономорфностью, медленным развитием и регрессом, отсутствием болевых ощущений и воспаления, образованием рубцов, отсутствием лимфаденита.

Высыпания носят название бугорковых и гуммозных сифилид. Первые появляются на коже и выглядят, как узелки. Вторые образуются в виде гумм под кожей, на слизистых оболочках, в костях, суставах и во внутренних органах.

Поздний нейросифилис возникает в третьем периоде и включает симптомы менингита, параличи, парезы, расстройства координации, болевые ощущения. При позднем висцеральном сифилисе в 90% случаев встречаются поражение сердца.

Лабораторная диагностика инфекции

Для постановки диагноза следует учитывать данные анамнеза, осмотра кожи и слизистых, лабораторное и инструментальное обследование. «Диагноз сифилиса, поставленный только на основании типичной клинической картины, не подтвержденный обнаружением бледной трепонемы или положительными серологическими реакциями, не может считаться правомочным» (В. П. Адаскевич, В. М. Козин, 2006).

Лабораторные методы диагностики сифилиса можно разделить на:

• бактериоскопические;
• серологические (трепонемные и нетрепонемные методы);
• исследование спинномозговой жидкости.

Бактериологическое исследование

Бактериологическое обследование является самым убедительным методом, связанным с обнаружением бледной трепонемы в отделяемом из твердого шанкра и сифилид, в пунктате лимфатических узлов, в амниотической жидкости. Под микроскопом возбудитель сифилиса имеет характерную для этого вида спиралеобразную форму с 8-12 завитками. При изучении их в темном поле видно, как трепонема вращается вокруг своей оси, сгибается и имеет излом в средней части тела.

Читайте также по теме

Если с первого раза обнаружить микроорганизм не удалось, то исследование повторяют, дополняя их серологическими способами диагностики. Отсутствие трепонем в типичных очагах возможно при длительном течении заболевания, предварительной антибактериальной терапии, нарушении техники забора материала или недостаточных навыках лаборанта, изучающего отделяемое.

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика крови является важным звеном не только в постановке диагноза, но и в оценке эффективности проводимого лечения. Методики основаны на обнаружении в крови пациента антител против антигенов трепонемы. Сложность заключается в том, что данный микроб имеет два вида антигенов – протеиновые и полисахаридные, что затрудняет диагностику. Разделение серологических тестов на нетрепонемные и трепонемные связано с различной точностью данных тестов.

Трепонемные тесты

Трепонемные методы являются отборочными и используются для ежегодных профилактических осмотров, лиц имеющих риск заразится сифилисом (медработники), у беременных, у пациентов перед оперативными вмешательствами любой сложности в стационарах и поликлиниках.

Трепонемные тесты необходимы для более детальной диагностики при наличии сомнительных, слабоположительных результатов, отрицательных реакций на ранних стадиях болезни. Они более сложные и дорогостоящие и должны применяться обоснованно, особенно при отсутствии клинической симптоматики. Показаны при подозрении на скрытый поздний и третичный сифилис.

К данным методам относят:

• К специфическим трепонемным тестам относится реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Суть ее в том, что антитела, меченные флюорохромом, соединяясь с антигеном, дают свечение, которое видно в лучах ртутно-кварцевой лампы. Метод настолько чувствителен, что позволяет обнаружить заболевание даже в серонегативный период первичного сифилиса. Ценно ее применение при обнаружении скрытого сифилиса и на поздних стадиях болезни. Во вторичном периоде наблюдается стопроцентная достоверность. Снижение медленными темпами положительной выявляемости в более низких концентрациях делает РИФ непригодной для контролирования процесса лечения пациентов.
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ) признана самым специфическим тестом на сифилис. Диагностика с помощью этого теста дорогая и сложная, поэтому использование ее осуществляется в затруднительных случаях при диагностике латентных форм, а также на ранних этапах болезни. Применима РИТ при обследовании беременных с подозрением на наличие сифилиса, выявления висцерального и нейросифилиса. Суть теста в том, что трепонемы под воздействием иммобилизинов и активного комплемента теряют подвижность и липнут к эритроцитам, выпадая в осадок при прохождении через центрифугу. Если процент неподвижных микроорганизмов менее 21, то тест считается отрицательным. Реакция становится положительной одновременно с основными тестами и РИФ. В первичном периоде у большого количества пациентов тест может быть отрицательным либо слабоположительным. А у больных третичным сифилисом, когда RW часто не дает результатов, РИТ показывает стопроцентный результат, как и при раннем врожденном поражении.
• Современные методы диагностики включают применение метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Суть ее состоит в обнаружении специфической последовательности ДНК микроорганизма. Метод является сверхточным и обнаружит даже минимальное количество трепонем в организме пациента. Данная реакция имеет большое значение в диагностике врожденного, первичного серонегативного сифилиса и поражения нервной системы.
• Иммуноферментный анализ является перспективным методом обнаружения антигенов трепонем, основанный на использовании антивидовых антител к иммуноглобулинам человека, связанных с ферментными маркерами. ИФА может показывать положительный результат в течение всей жизни, даже после успешного излечивания от сифилиса.
• Иммуноблотинг определяет иммуноглобулины класса М и G в крови человека с высокой степенью чувствительности, помогая поставить диагноз на разных этапах развития болезни, включая врожденный сифилис.

Исследование спинномозговой жидкости применяется при подозрении на нейросифилис и оценки эффективности лечения данной патологии. Ликвор забирают на анализ путем пункции и оценивают наличие воспалительного компонента (белок, лейкоциты). Проводят реакцию Вассермана с тремя разведениями спинномозговой жидкости, РИТ и РИФ.

Нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты, как экспресс диагностика сифилиса (ЭДС) отличаются меньшими финансовыми затратами, что позволяет охватить большой объем населения и выявить заболевание на более ранних стадиях. Среди недостатков отмечаются низкая чувствительность в первые недели болезни и при третичном сифилисе, появление ложноположительных результатов.

Лабораторная диагностика сифилиса

… сифилис характеризуется богатой палитрой манифестных и латентных форм, распознавание которых основывается на комплексном клинико-лабораторном обследовании больного.

Материалом для исследования от больных сифилисом служит кровь, отделяемое твердого шанкра, пунктат регионарных лимфатических узлов, ликвор. Выбор материала для исследования и метода микробиологической диагностики определяется стадией патогенеза болезни.

Лабораторная диагностика включает бактериоскопический (в начальной стадии) и серологический методы. Бактериологическое исследование обычно не проводят, так как доступные методы выделения чистой культуры возбудителя не разработаны.

В связи с тем, что возбудитель сифилиса (Treponema pallidum) в отличие от других микроорганизмов плохо культивируется на питательных средах in vitro, а также слабо воспринимает анилиновые красители, все существующие методы ее детекции можно подразделить на прямые и непрямые:
• прямые тесты основаны на непосредственном выявлении возбудителей в очагах поражения; ним относятся: (1) темнопольная микроскопия (в том числе прямой тест на Т. pallidum с флюоресцентными антителами – DFA-TP), (2) RIT (rabbit infektivity test) – заражение материалом от больных кроликов, и (3) ПЦР (пролимеразная цепная реакция – метод, базирующиеся на амплификации нуклеиновых кислот).
• непрямые тесты основаны на выявлении АТ к возбудителю сифилиса в сыворотке крови – серологическая диагностика (лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основанный на иммунологической реакции антиген-антитело (АГ-АТ)), а также редко используемые гистологические исследования.

В свою очередь, все существующие в настоящее время серологические тесты на сифилис подразделяются на две основные группы:
• нетрепонемные : реакция связывания комплемента с кардиолипиновым АГ (РСКк), реакция микропреципитации (РМП), тест быстрых плазменных реагинов – Rapid Plasma Reagins (RPR), Veneral Disease Research Laboratory (VDRL), тест с толуидиновым красным – Toluidin Red Unheated Serum Test (TRUST);
• трепонемные – ракция связывания комплемента с трепонемным АГ (РСКт), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ или РИТ), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) (за рубежом – FTA – Fluorescent Treponemal anibody) с вариантами: РИФ-200 (FTA-200), РИФ-абс (FTA-abs), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – за рубежом – Treponema pafluidum haemagglutination assay (TPHA), иммуноферментный анализ (ИФА) – за рубежом – Enzymelynked immunosorbent asay (ELISA), иммуноблоттинг (Western Blot).

ПРЯМЫЕ ТЕСТЫ

Темнопольная микроскопия . Прямая визуализация трепонем методом темнопольной микроскопии является убедительным доказательством трепонемной природы заболевания. Наиболее эффективен этот метод при первичном и вторичном сифилисе, наличии поражения кожи и слизистых оболочек. При микроскопии следует дифференцировать Т. pallidum, подвид pallidum, с нитями фибрина, а также с трепонемами нормальной микрофлоры организма человека – Т. refringens и Т. denticola. Т. refringens колонизирует слизистые оболочки наружных половых органов и отличается выраженной подвижностью и отсутствием сгибательных движений. Т. denticola колонизирует слизистую оболочку ротовой полости, ее завитки короче и направлены под более острым углом. Темнопольная микроскопия обладает чувствительностью 74–86% и специфичностью до 97% в зависимости от квалификации исследователя. Чувствительность может снижаться, если повреждение было протерто антисептиком. Вместе с тем отрицательный результат, обусловленный различными факторами, не является основанием для исключения диагноза сифилиса и требует дальнейшего подтверждения методами серологической диагностики. Кроме того, с помощью этого метода невозможно наблюдать за динамикой инфекционного процесса и оценивать эффективность терапии.

Прямой тест на Т. pallidum с флюоресцентными антителами (DFA-TP) использует флюоресцеинконъюгированные АТ для окраски организма в мазках и срезах тканей. DFA-TP не требует подвижных организмов, является более чувствительным и специфичным, но более дорогим и технически сложным, чем темнопольная микроскопия.

На чувствительность обоих микроскопических методов может отрицательно повлиять давность возникновения или состояние повреждения, а также то, получал ли пациент лечение.

Биологический метод диагностики (RIT – заражение материалом от больных кроликов), несмотря на его высокую чувствительность, применяется весьма ограничено из-за таких факторов, как длительность получения результатов и высокая стоимость. Он практически не используется в настоящее время.

К прямым методам определения Т. pallidum по данным ряда зарубежных авторов относятся методы, базирующиеся на амплификации нуклеиновых кислот, такие как ПЦР, которые могут определять наличие всего 10 трепонем в повреждениях, тканях плаценты и других тканях организма. Они существенно улучшили чувствительность и специфичность прямых методов детекции. Множественный ПЦР с одновременным определением Т. pallidum, вируса герпеса типа 2 и Haemophilis ducreyi используется для постановки этиологического диагноза у пациентов с GUD (genital ulcer disease), а также для обоснования алгоритмов синдромного лечения. Поскольку ПЦР-методики для сифилиса коммерчески недоступны, они остаются инструментом исследователей.

( ! ) Ведущая роль в лабораторной диагностике сифилиса принадлежит серологическим методам исследования, так как Т. pallidum порождает иммунные ответы различного характера. Рассмотрим существующие в настоящее время серологические тесты на сифилис (непрямые тесты).

НЕПРЯМЫЕ ТЕСТЫ

Нетрепонемные тесты . В нетрепонемных тестах применяется АГ нетрепонемного происхождения (как правило, кардиолипин-лецитин-холестериновый АГ). АТ к фосфолипидным АГ на поверхности трепонем дают перекрестную реакцию с кардиолипиновыми АГ млекопитающих. Флоккуляционные (хлопьеобразующие) методики для обнаружения этих АТ к фосфолипидам были разработаны как неспецифичные скрининговые тесты. К ним относятся РМП и ее модификации: RPR-, VDRL-, TRUST-тест. В данных тестах обнаруживаются IgG- и IgM-АТ к липидам клеточной стенки Т. pallidum, которые появляются в крови примерно через 1 нед. после формирования твердого шанкра. Эти тесты просты, быстры, недороги и обладают превосходной чувствительностью, особенно в ранний период инфекции. Главные недостатки – невозможность использования цельной крови, необходимость ротатора или микроскопа, возможность ложноположительных результатов. У беременных женщин до 28% положительных результатов RPR могут быть биологически ложноположительными. Ложнонегативные результаты могут быть при избытке АТ, что известно как феномен prozone. Перекрестная реактивность может иметь с другими трепонемными инфекциями, включая фрамбезию и пинту.

Нетрепонемные тесты могут быть качественными или полуколичественным. RPR- и VDRL-титры возрастают у пациентов с острой инфекцией, реинфекцией или реактивацией давней инфекции, которая не былa удовлетворительно вылечена. Около 72–84% пациентов с первичным или вторичным сифилисом демонстрируют 4-кратное снижение RPR- и VDRL-титров через 6 мес. после завершения правильного лечения. Скорость серореверсии зависит от титра до лечения и стадии заболевания. Индивиды с первым эпизодом инфекции более склонны к серореверсии, чем индивиды с повторной инфекцией. Поэтому нетрепонемные тесты используются не только для определения активной инфекции, но и для наблюдения за эффективностью лечения.

Трепонемные тесты , такие как РСКт, РИБТ или РИТ, РИФ (за рубежом – FTA и FTA-ABS), РПГА (TPHA или ТРРА), используются для подтверждения позитивных скрининговых тестов, распознавания ложноположительных результатов нетрепонемных тестов, при клиническом, эпидемиологическом и анамнестическом подозрении на сифилис, для диагностики скрытых форм заболевания, установления ретроспективного диагноза пациента. В трепонемных тестах применяются АГ трепонемного происхождения.

РИТ и РИФ обладают более высокой чувствительность (74–94 и 84–99%) и специфичностью (99 и 97% соответственно) и применяются для подтверждения результатов отборочных реакций, распознавания ложноположительных результатов РМП и РСК, а также установления ретроспективного диагноза сифилиса. Недостатками этих методов является техническая сложность, длительность постановки, субъективизм в оценке результатов, высокая стоимость исследования, необходимость высококвалифицированных сотрудников. Следует учитывать также, что, по данным ряда авторов, примерно у 85% адекватно пролеченных больных трепонемные тесты остаются положительными в течение нескольких лет и даже в течение всей жизни, поэтому не могут быть использованы в качестве контроля излеченности. Трепонемные тесты дороги, требуют оборудования и технической подготовки, доступны только в центральных лабораториях.

Иммуноблоттинг предполагался как альтернатива РИФ-абс (FTA-ABS) в качестве подтверждающего теста. Он более чувствителен, чем РИФ-абс (FTA-ABS), но менее чувствителен, чем РПГА (ТРРА). Частота ложноположительных результатов немного меньше в трепонемных тестах, чем в нетрепонемных.

Трепонемные тесты обычно не используются для скрининга, поскольку они не так чувствительны, как нетрепонемные, в первые 2–3 нед. первичной стадии сифилиса. Трепонемные АТ часто персистируют в течение жизни, делая эти тесты менее применимыми в качестве подтверждающих в областях с высокой распространенностью заболевания; они также неприменимы для наблюдения за эффективностью лечения.

В последние годы в отечественную практику лабораторной диагностики сифилиса внедряются стандартизированные высокоинформативные методы серодиагностики – ИФА и РПГА. Принцип ИФА заключается в соединении комплекса АГ-АТ с конъюгатом, содержащим ферментную метку, выявляемую с субстратной смеси. РПГА применяется для выявления специфических АТ к T. pallidum в сыворотке крови: при соединении АГ T. pallidum со специфическими АТ в реакции на микропланшете наблюдается феномен агглютинации эритроцитов. Плюсами данных методов является то, что тест-системы для ИФА и РПГА сертифицированы и регулярно контролируются соответствующими организациями. Из-за простоты постановки, возможности автоматического учета и быстроты получения результатов при исследовании огромного количества проб ИФА и РПГА могут использоваться как в качестве отборочных, так и подтверждающих реакций, поскольку превосходят по чувствительности, специфичности, воспроизводимости КСР и не уступают РИТ и РИФ. Но, следует отметить, что ИФА, как и другие реакции на сифилис, могут давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Первые могут возникнуть за счет ревматоидного фактора (представляющего собой IgG человека) перекрестно реагирующего с трепонемными АГ; за счет АТ, образующихся при различных системных заболеваниях или индуцированных лекарственными препаратами, наркотиками, нарушениями обмена; у новорожденных – путем образования в организме плода или ребенка IgМ-АТ к IgG матери, что значительно осложняет интерпретацию результатов и установление диагноза врожденного сифилиса. Ложноотрицательные результаты реакции обусловлены наряду с техническими ошибками конкуренцией между IgМ и IgG, поскольку последний обладает большим аффинитетом. Отрицательной стороной РПГА служит то, что данный тест не может быть использован в качестве критерия излеченности заболевания, так как негативация таких реакций, как правило, затруднена, более того, они могут оставаться положительными в течение всей жизни.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

Недостатки серодиагностики сифилиса послужили толчком к разработке молекулярно-генетических методов диагностики сифилиса, получивших широкое распространение в последние годы. Запатентованы способы ПЦР-диагностики сифилиса (метод определения специфицеских последовательностей ДНК T. pallidum, заключающийся в амплификации ДНК). Однако несмотря на целый ряд преимуществ ПЦР-диагностики, эти методы обладают и существенными недостатками, среди которых необходимо отметить их высокую стоимость, обусловленную дороговизной праймеров для ПЦР-диагностики и высокой стоимостью лабораторного оборудования, что ограничивает применение этих методов в лабораторной практике.

В настоящее время разрабатываются новые диагностические методы, основанные на выявлении молекулярных маркеров органных поражений при сифилисе методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС). Привлечение в арсенал методов лабораторной диагностики сифилиса ГХ-МС позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие T. pall >18 -С 20 ). Таким образом, привлечение в диагностический арсенал методов газовой хроматографии и масс-спектрометрии позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие поражения органов и систем при отсутствии положительных серологических реакций и выраженных клинических проявлений болезни.